Skip to content

radom szpital na tochtermana ad 6

3 miesiące ago

465 words

Ekspresję fosfotransferazy neomycyny, produktu genu NeoR, wykryto również we wszystkich populacjach komórek transdukowanych i żadnej z niepoddanych transdukcji komórek (dane nie przedstawione). Dalsze dowody na ekspresję genu NeoR uzyskano przez udaną hodowlę TIL od wszystkich pacjentów z wyjątkiem Pacjenta 2 w 300 .g na mililitr analogu neomycyny G418. Niepransdukowane komórki wszystkich pacjentów zmarły w stężeniu G418 przekraczającym 300 .g na mililitr. Przykład (od Pacjenta 5) tempa wzrostu transdukowanych genu i niepoddanych transdukcji komórek w różnych stężeniach G418 pokazano na Figurze 1. Tak więc, na podstawie bezpośredniego testu wstawienia genu metodą analizy Southern blot, test na fosfotransferazę neomycyny i oporność na G418 w hodowli, udaną insercję i ekspresję genu NeoR wykazano w TIL pięciu pacjentów badanych przed reinfuzją .
Detekcja transdukowanych genów we krwi i próbkach nowotworowych
Rycina 3. Rycina 3. Wykrywanie reakcji łańcuchowej polimerazy genu NeoR w limfocytach krwi obwodowej i limfocytach wyhodowanych z próbek nowotworowo-biopsyjnych od pacjenta infuzyjnego transfekowanym genem TIL. Próbki genomowego DNA amplifikowano przez łańcuchową reakcję polimerazy z syntetycznymi starterami oligonukleotydowymi dla genu NeoR i ludzkiego genu beta-globiny. Zamplifikowany gen beta-globiny został wykryty przez wybarwienie bromkiem homidium, a gen NeoR metodą analizy Southern blot. W celu półwyfantacji wyników testu łańcuch-reakcja polimerazy, seryjne 10-krotne rozcieńczenia transdukowanej NeoR, TIL dobranej G418 zmieszano z nietransdukowaną TIL i test przeprowadzono równolegle z próbkami od pacjenta.
Ryc. 4. Ryc. 4. Wyniki testów jednojądrowych z łańcuchem polimerazy w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC, koła) i próbek z biopsji guza (kwadraty) otrzymanych od pacjentów w różnych przedziałach czasowych po infuzji transdukowanego genu TIL. Otwarte symbole oznaczają wyniki negatywne, a stałe symbole pozytywne wyniki. Wszystkie wyniki zostały potwierdzone w co najmniej dwóch oddzielnych testach Southern blot. Testy przeprowadzono i oceniono w sposób zaślepiony.
Przed i w różnych czasach po wlewie komórek znakowanych genem pobierano próbki krwi i guza oraz wykonywano analizę reakcji łańcuchowej polimerazy w celu oceny obecności genu NeoR. Próbki jednojądrzastych komórek krwi obwodowej wszystkich pacjentów badanych przed infuzją były ujemne. Próbki krwi pobrane podczas infuzji genetycznie wydzielonych komórek i trzech minut i jednej godziny później były silnie pozytywne dla genu NeoR u pacjentów 1, 2, 3 i 5; żadna odpowiednia próbka nie była dostępna dla Pacjenta 4. Przykład danych o reakcji łańcuchowej polimerazy uzyskanych z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej i próbek nowotworu od Pacjenta 5 pokazano na Figurze 3, a podsumowanie analiz łańcuchowo-reakcyjnych wszyscy pacjenci są pokazani na rycinie 4. Ze względu na model rozprzestrzeniania się nowotworu, wiele próbek z biopsji guza można było uzyskać jedynie od Pacjentów 3 i 5 po wlewie komórkowym. Krążące jednojądrzaste komórki krwi obwodowej zawierające gen NeoR znaleziono konsekwentnie przez pierwsze 19 do 22 dni w próbkach od wszystkich pacjentów (ryc.
[hasła pokrewne: pcuz polkowice, histiocytoza, gentamycyna ]

0 thoughts on “radom szpital na tochtermana ad 6”

  1. [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: Oprogramowanie dla stomatologii[…]